降烟碱解淀粉芽孢杆菌和边缘假单胞菌 原生质体融合选育高效降烟碱菌株

获取1株高效降解烟碱的融合子,以解淀粉芽孢杆菌T11和边缘假单胞菌作为亲本菌株,使用溶菌酶破除亲株细胞壁后以40%PEG-6000诱导解淀粉芽孢杆菌T11原生质体和已热力灭活的边缘假单胞菌原生质体进行融合,并检测了融合子的降烟碱能力。对融合子利用青霉素抗性初筛获得了176株再生融合子,利用烟碱降解率为指标进行降烟碱复筛实验后获得5株烟碱降解能力较高的融合子。根据融合子遗传稳定性分析及与亲本菌株烟碱降解效率的对比,获得了1株烟碱降解率比亲本菌株更强的融合子A2。获得的高效降解融合子A2在第5天后其烟碱降解率基本稳定在93%。     

降烟碱融合子及其亲株大田降解烟叶中烟碱的研究

为降低上部烟叶中过高的烟碱含量,使用解淀粉芽孢杆菌T11、边缘假单胞菌和融合子A2等3种不同菌液对烟株进行叶面喷洒和根灌处理,研究不同菌液、处理次数、处理方式对烟碱降解率、菌株驻留时间及上部烟叶品质的影响。结果表明,根灌的处理方式不能达到降解烟叶中烟碱的目的,而使用菌液进行3次叶面喷洒后其降解烟碱的效果较好,解淀粉芽孢杆菌T11、边缘假单胞菌和融合子A2的烟碱降解率分别为17.7%、18.5%、25%,融合子A2的降解烟碱的效果最佳;绿色荧光蛋白(GFP)示踪试验中,使用菌液喷洒叶面后,菌株随着时间的推移会逐渐消亡;而处理后烟叶品质各化学成分含量在适当范围内,上部烟叶品质有得到改善趋势。在菌液喷洒烟叶条件下,烟叶中的烟碱含量显著降低,上部烟叶品质得到改善。